Принципы микробиологии и дезинфекции в клининге

1.1. Микробиология

• микроскопически малые существа,
• существовали задолго до появления человека,
• живут повсюду (убиквитарные), например,
  • в воздушной среде,
  • в почве,
  • в водной среде,
  • на коже,
  • на всех поверхностях;
• легко передаются, например, посредством
  • воздушно-капельного механизма инфицирования (вдыхание инфекционных частиц) или,
  • прямого или опосредованного контактного механизма инфицирования (при прикосновении к зараженной поверхности);
• легко адаптируются к окружающей среде.

Наиболее значимые микроорганизмы

• бактерии (например, стафилококк, сальмонелла),
• грибы (например, плесень, дрожжи),
• вирусы (например, ВИЧ (СПИД), вирусы гриппа, норовирусы),
• простейшие (например, возбудители малярии, возбудители амебной дезинтерии, нарколепсия).

1.2. Бактерии

Характеристики бактерий

• одноклеточные организмы, без истинного ядра,
• имеют клеточную стенку,
• размер: около 0.1 – 5 мкм; некоторые могут быть крупнее (обычно просто видимы под микроскопом),
• размножаются делением клеток,
• некоторые бактерии образуют споры в неблагоприятных условиях (например, бациллы),
• некоторые бактерии используют для передвижения жгутики.

Бактерии различают по их внешней форме:

• шаровидные (например, стафилококки, сальмонеллы),
• палочковидные (например, колиформные бактерии, сальмонеллы).

Кокки – шаровидные типы бактерий.

В зависимости от их организации различают, например, стафилококки (расположены в форме гроздьев винограда), стрептококки (цепочками) и диплококки (парами). Стафилококки, стрептококки и пневмококки являются примерами шаровидных бактерий, которые обычно попадают в организм человека.

Палочковидные бактерии – продолговатые, цилиндрические типы бактерий. Всем известным примером являются такие кишечные бактерии, как кишечная палочка и сальмонелла. Палочковидные бактерии имеют один и более жгутик, который они используют для передвижения. Бациллы принадлежат к группе палочковидных бактерий, которые могут образовывать споры в состоянии покоя.

Простые изогнутые палочковидные бактерии (например, вибрионы) представляют особую разновидность. Холерный вибрион (возбудитель холеры) – типичный пример этого типа.

Спирали – следующий тип палочковидных бактерий, спиралевидные или извитые. Спиралевидные, извитые лептоспиры вызывают инфекционное заболевание лептоспироз, который может передаваться от животных к человеку.

1 - Шаровидные бактерии (стафилококк); 2 - Палочковидные бактерии (кишечная палочка); 3 - Изогнутые палочковидные бактерии (холерный вибрион); 4 - Извитые палочковидные бактерии (лептоспиры);

Условия окружающей среды, которые могут повлиять на рост бактерий:

• температура (тепло),
• показатель pH,
• питательная среда (такие загрязнения, как жир, белок, сахар, углеводы и др.),
• кислород,
• влажность.

В оптимальных условиях (температура, показатель pH, питание, влажность и др.) их количество может удваиваться каждые 20-30 мин.

Примеры заболеваний, вызываемых бактериями:

• сальмонеллез,
• скарлатина,
• дифтерия,
• коклюш,
• холера,
• туберкулез,
• столбняк,
• сибирская язва и др.

Спорообразование

Некоторые типы бактерий способны образовывать споры, известные как эндоспоры, в неблагоприятных условиях окружающей среды (например, при изменениях температуры, доступности питания, показателя pH и др.). Эти споры – покоящиеся формы, которые не используются для размножения (такие как грибковые споры, например). Бактерии могут вымереть, а споры могут выживать долгое время даже в неблагоприятных условиях. Эндоспоры, образованные бактериями, отличаются высоким уровнем устойчивости к жаре, обезвоживанию, радиации и предельным показателям pH и могут выживать долгое время (до нескольких тысяч лет). Такой уровень устойчивости обусловлен многослойностью оболочки и низким содержанием жидкости. Споры развиваются, как только условия окружающей среды снова становятся благоприятными. Споры образуют новые клетки, способные к жизни (бактерии).

Примерами спорообразующих бактерий являются бациллы и клостридии. Столбняк вызывается палочковидными спорообразующими бактериями, известными как столбнячная палочка.

1.3. Грибы

Грибы не относятся ни к растениям, ни к животным.

Различают:

• грибы с гифами, или мицелием (например, плесень, нитчатые грибы),
• дрожжи.

Грибы с гифами, или мицелием, размножаются как половым путем, посредством образования сетки (мицелия) из тонких нитей (гифов), так и образованием спор. Они в основном заселяют твердый субстрат, например, почву, древесину или другие живые или мертвые органические ткани, такие как кожа.

Одноклеточные грибы (дрожжи) в основном размножаются бесполым способом через почкование.

Оптимальными для грибов условиями окружающей среды являются влажность и тепло (например, в раздевалках, душевых, бассейнах, туалетах и др.).

Характеристики грибов

Плесень

• размножается половым путем через ветвление нитей, называющихся гифами, или через образование спор,
• гифы образуют тело гриба, или мицелий,
• тело гриба видимо невооруженным глазом,
• плесень растет не только на поверхности, но и проникает в материал,
• нитчатые грибы (дерматофиты) вызывают инфекции кожи, такие как грибок стопы,
• плесень может выделять ядовитые вещества,
• черный грибок, который появляется в санитарных помещениях (Аспергилл черный), часто обрабатывается только поверхностно,
• плесень также используется в пищевом производстве, например, съедобная плесень в голубых сырах.

Дрожжи

• дрожжевой гриб круглый,
• не виден невооруженным глазом,
• размножается через отделение дочерней клетки (почки),
• дрожжи также полезны в пищевом производстве, например, спиртовое брожение для производства пива, дрожжевая выпечка,
• кандида альбиканс – значимый вредный дрожжевой гриб, который приводит к заболеваниям кожи, слизистых и кишечника.

1 - Гифы плесени; 2 - Пивные дрожжи

1.4. Вирусы

Вирусы паразитируют в клетках живых существ. Они отдают свой генетический материал (ДНК/РНК) для размножения и распространения клеткам-хозяевам, которые становятся ответственными за размножение новых вирусов. Вирусы не имеют собственного метаболизма и поэтому зависят от метаболизма клетки-хозяина. Некоторые вирусы имеют дополнительную оболочку, которая называется вирусной оболочкой. Они называются оболочечными вирусами. Вирусы без такого типа оболочки называются безоболочечными. Вирусная оболочка очень важна для интеграции вирусов в клетки-хозяева, для их устойчивости в ответ на влияние окружающей среды, дезинфицирующих средств и их способность изменять поверхность вируса. Безоболочечные вирусы принято считать менее чувствительными, что делает их деактивацию дезинфицирующими мерами более сложной.

Характеристики вирусов

• неживые организмы (не могут размножаться самостоятельно и не имеют собственного метаболизма),
• намного меньше, чем бактерии (средний диаметр около 0,018 мкм); видимы только под электронным микроскопом,
• могут размножаться только в живых клетках растений, животных, людей или бактерий,
• вирусные заболевания нельзя вылечить антибиотиками,
• в сравнении с бактериями и грибами, вирусы обычно сложнее деактивировать с помощью дезинфектантов (особенно безоболочечные вирусы),
• часто они очень губительны (погибает почти каждая клетка, зараженная вирусом),
• нельзя обнаружить с помощью блот-теста/мазка.

Заболевания

• СПИД,
• Вирусный грипп (различные типы),
• Гепатит (желтуха),
• Вирус гастроэнтерита (например, желудочно-кишечные заболевания, вызванные норовирусом),
• Герпес,
• Краснуха,
• Ветряная оспа,
• Полиомиелит,
• Корь и др.

Вирус гриппа

2.1. Методы выявления микроорганизмов для контроля дезинфекции

Доказательство наличия микроорганизмов и их размножения и формирования культур важно для распознавания микробов (например, диагноз определенной болезни) и контроля дезинфицирующих мероприятий.

Самые важные методы:

• блот-тест,
• мазок,
• микроскоп,
• АТФ-измерения.

Блот-тест

Питательная среда блот-пластины прижимается, как штамп, к исследуемой поверхности; все имеющиеся микробы переносятся. Эти пластины затем помещаются в инкубатор при 37 ℃ на 24-48ч, так чтобы бактерии размножились и стали видимыми колониями.

Поскольку площадь блот-пластины известна, подсчет этих колоний позволяет количественно установить уровень микробной нагрузки на поверхность. Таким способом возможно определить уровень гигиены. Выращиваемые колонии бактерий можно подготовить специальным образом, чтобы иметь возможность определить их тип (дифференциация). Этот процесс подходит для мониторинга уровня гигиены на плоских поверхностях, позволяющих провести блот-тест.

Мазок

Влажным стерильным тампоном проводят по определенному участку исследуемой поверхности. Если требуется только качественный анализ, тампоном сразу же проводят по питательному агару, который впоследствии инкубируется. Для подсчета микробной нагрузки, тампон необходимо погрузить в соответствующий раствор для разведения. Серия разведений, образованных из данного раствора, затем наносится на питательный агар и выращивается в инкубаторе при 37 ℃ (обычно в течение 1-2 дней). Результат показывает микробную нагрузку на исследуемой поверхности. Мазок – более трудоемкий для оценивания, чем блот-тест, но он действительно позволяет брать образцы с неровных и труднодоступных участков.

Микроскоп, окрашивание (окраска по Граму)

Бактерии и грибы можно увидеть под микроскопом. Для этого используются различные техники окрашивания; эти техники можно использовать для окрашивания микробов или определенных элементов микробов для их видимости. Окрашивание по Граму – важный метод окрашивания бактерий. В этом процессе используется специальный краситель для окрашивания конкретных клеточных структур в клеточной стенке определенных бактерий. Бактерии можно классифицировать на грамположительные (окрашиваемые) или грамотрицательные (не окрашиваемые), оценив их окрашивание под микроскопом.

Вирусы нельзя определить с помощью обычного оптического микроскопа. Они видимы только с помощью электронного микроскопа.

АТФ-тестирование

Биолюминесцентный метод или АТФ-тест. При этом методе АТФ (аденозинтрифосфат), который содержится в клетках бактерий, выявляется с помощью биолюминесценции. Чтобы из АТФ получить свет, используют энзимный комплекс. Выделяемый свет можно измерить с помощью люминометра (прибор для измерения света). Результат измеряется в RLU (относительных световых единицах). Преимущество этого метода в том, что результаты известны спустя несколько минут. Необходимые измерительные приборы маленькие и легкие в использовании, поэтому измерения можно проводить прямо на месте. Недостатком этого процесса является стоимость приобретения.

3.1. Санация / дезинфекция / стерилизация

Санация

Под санацией понимают снижение числа микробов посредством профилактических или дезинфекционных мероприятий. В отличие от дезинфекции и стерилизации обязательным условием санации не является определенное или полное снижение числа микробов.

Дезинфекция

Под дезинфекцией понимают уничтожение или деактивацию (необратимое повреждение) всех болезнетворных (патогенных) микробов, в результате чего больше нет риска инфицирования от обработанных объектов.

Дезинфицирование поверхностей проводится в чувствительных к гигиене участках, таких как

• больницы,
• поликлиники,
• врачебные и стоматологические хирургические кабинеты,
• микробиологические лаборатории и др.

Задача и цель дезинфекции поверхности – прервать пути заражения. Микроорганизмы уничтожаются или деактивируются компонентами дезинфектантов.

Стерилизация

Под стерилизацией понимается уничтожение или деактивация всех бактерий, грибов, вирусов и спор.